房室结双径路的诊断依据为：行心房程控电生理检查时，心房期前刺激配对间期缩短至一定程度后，出现房室结A-H间期跳跃式延长差值≥50ms，同时排除其他可导致房室传导异常的器质性病变；部分患者行此类检查可诱发或终止阵发性室上性心动过速，结合上述传导特征可明确诊断。
房室结双径路诊断流程包括：
1.常规体表心电图检查
具体为通过体表心电图记录心脏电活动，可间接发现房室结双径路相关表现，如存在PR间期延长、一度房室传导阻滞，或伴发房室结折返性心动过速时的快速规整心律失常波形，为初步筛查提供依据。
2.食管心脏电生理检查
具体是经鼻腔置入食管电极导管至心房水平，给予心房分级递增或期前刺激，当刺激的配对联律间期缩短到一定程度时，出现S₂R间期突然跳跃式延长延长幅度≥50ms，此跳跃现象是诊断房室结双径路的关键依据，该方法简便无创，为临床常用诊断手段。
3.心内电生理检查
具体为将电极导管经静脉置入心腔不同部位，同步记录心内各部位电活动，可直接观察到房室交界区存在快径和慢径两条传导径路的电生理特征，明确双径路的不应期差异及传导特性，是诊断房室结双径路的金标准，适用于需同步明确心律失常机制或准备行射频消融治疗的患者。
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